In-Fusion^®クローニング

SnapGeneは各種クローニング法をシミュレーションすることが可能です。このチュートリアルでは In-Fusion^®クローニングのシミュレーションをご紹介します。

1. 【準備】配列を入手する

今回は、pCDNA3.1に Luciferase 遺伝子をクローニングするというシミュレーションを行います。使用するデータを下記よりダウンロードしSnapGeneで読み込み保存します。ファイルの読み込みはSnapGene基本操作：3.ファイルを読み込むを参照して下さい。

ルシフェラーゼ遺伝子の配列は、pGL3-Promoter を使います。

2. In-Fusion^®クローニング

ツールバーにある「アクション」から「In-Fusion^®クローニング」を選択して、「断片を挿入」をクリックしてください。

「ベクター」タブで置換したい部分を選択し、「断片」タブで挿入したい部分をクリックします。ここでは、MCS（895 - 985 bp) と Myc (986-1015 bp) の塩基配列を選択します。

「断片」タブを選択し、右側の「断片のソース」のドロップダウンリストから pGL3-Promoter.dna を選択し、マップ上で挿入したい部分をクリックします。ここでは Luciferase (895 - 2547 bp) を選択します^*。

「産物」タブを選択し、右側の「オーバーラップしているPCRプライマーを選択」をクリックします。

Tm値やオーバーラップする塩基数を設定して「プライマーを選択します」をクリックします。

シークエンスビューでクローニング後の配列を確認したり、プライマービューで実際に使用するプライマーの配列を確認しすることができます。

シークエンス、プライマーに問題がなければ、右下の「産物作成」に任意のファイル名（今回は “pCDNA3.1-Luc” ）を入力し、「クローン」ボタンをクリックします。

pCDNA3.1-Luc.dna ファイルが作成され、In-Fusion^® クローニングを用いたプラスミドマップがマップビューに表示されます。

マップビューおよびシークエンスビューで、 pcDNA3.1+/C-Myc（MCS）に Luciferase遺伝子 がクローニングされていることを確認できます。

履歴ビューからは、In-Fusion^®クローニングの過程を、マップ形式/テキスト形式で確認できます。

新たに作成したプラスミドマップは保存されていませんので、任意のフォルダの保存するのを忘れないようにしてください。